Apo-CaM (左) 和Holo-CaM (右) 3D 结构,钙原子 (红),蛋氨酸(黄), 酪氨酸(绿) 和组氨酸(蓝)
用AWS石英晶体分析仪研究钙调蛋白聚合的钙离子
芯片:金表面覆盖石墨涂层芯片
步骤:
1)将10μl的 60μM钙调蛋白溶液滴到芯片表面,室温下干燥。
2)注入5ml的缓冲溶液,PH=7,0.1M的Tris/HCl溶液
3)频率稳定后,每次持续添加30μl 的10mM CaCl2溶液,记录频率变化。每次添加溶液会产生频率噪音峰。
图A每次添加30μl 的10mM CaCl2溶液的频率随时间变化/图B每次添加30μl 的10mM CaCl2溶液的频率随钙离子浓度变化
起初频率没有发生变化,当Ca2+浓度增加到180 mM时,
钙调蛋白开始集合Ca2+,芯片表面质量增加直到钙离子浓度增加到约350 mM。此时由于钙离子的存在,钙调蛋的构象发生变化,由Apo-CaM 转化为 Holo-CaM.
当构象由Apo-CaM 转化为 Holo-CaM时,结构变得易弯曲,使深处膜层不易再聚合钙离子。
通过106Hz频率变化计算得到,电极表面增加的质量为0.12μg
以1个钙调蛋白可结合4个钙离子计算,可得到钙调蛋白聚合了0.1μg的钙离子
两者不同是因为有钙离子直接吸附到了芯片表面。